bevictor伟德官网入口(World)有限公司

400-168-8906
EN
【专能优品】熔解曲线法解决方案(下)
发布会时间:

多色熔解曲线分析技术在多色荧光的基础上结合了熔解曲线分析,增加了单一荧光通道可检测靶标数量,保留荧光PCR优点的同时使可检测靶标数大大增加,在分子诊断技术领域具有广阔前景。

bevictor伟德官网入口结合底层技术方法创新,开发专能优品,形成核酸原料、酶、荧光标签三套熔解曲线解决方案。



技术介绍

熔解曲线法基于不同DNA双螺旋结构变性一半的温度(熔解温度Tm)不同,在PCR反应结束后,通过逐渐升高温度的方式,监测荧光信号变化与温度的关系曲线(熔解曲线),通过分析每个靶标对应的熔解曲线,实现各个靶标的检测。


非对称熔解曲线:

采用不对称扩增,使用不同浓度或Tm值差异较大的上游引物和下游引物,PCR扩增后将产生一定比例的单链产物。该方法由于是线性扩增,扩增产量低,灵敏度低,同时,上下游引物比例难于优化,设计难度较大,容易出现基线平、“鼓包”等问题。

 

 对称熔解曲线:

 采用对称扩增,上游引物和下游引物的浓度相同, PCR扩增产物为双链DNA。该方法是指数扩增,灵敏度高,但对称扩增没有单链产物,在建立荧光强度和Tm值之间的关系时存在技术壁垒。



熔解曲线专用酶解决方案

BioZues® Mc HS Taq DNA Polymerase

为了解决非对称熔解曲线技术难题,bevictor伟德官网入口全新推出抗体封闭的BioZues® Mc HS Taq DNA Polymerase,具有极低5’-3’外切核酸酶活性,适用于熔曲qPCR各种场景包括SNP分型,超多重检测等,不适用于探针法qPCR。可应用于胚系突变的SNP检测,检测核酸为基因组DNA,例如药物基因组学、化疗用药检测、精神病用药检测等。



产品信息

货号

产品

浓度

规格

SE0431-005

BioZues® Mc HS Taq DNA Polymerase

5 U/μl

500 U

SE0431-025

2500 U

SE0431-500

4 x 2500 U



产品特点

1. 多重扩增效果好,单管检测可达16个靶标

2. 灵敏度高,每个靶标检测低至0.1ng/反应

3. 不对称扩增单链产量高

4. 抗抑性好,兼容不同样本类型,可用于血液直扩

5. 分型效果好,可解决不对称扩增中,上下游引物比例难于优化,设计难度大的问题



实际样本测试数据

多重扩增测试

使用SE0431在非对称PCR体系中进行单孔8个靶标检测,结果显示:SE0431能明显区分杂合型、野生型和突变型,并且熔曲峰值高,峰形清晰,基线稳定。

undefined
undefined
undefined
杂合型(HET)
野生型(WT)
突变型(MT)

                                                                   

                                  


抗抑性测试

使用SE0431,分别以野生型质粒、人细胞gDNA、人全血gDNA、人血斑卡gDNA为模板,1ng/ul的gDNA进行单孔4个靶标检测,结果显示:在多种形式的样品中均能进行有效SNP分型,具有较好兼容性,可用于血筛、血液直扩等。

undefined
undefined
质粒
基因组DNA
undefined
undefined
全血
 血斑卡




荧光标签解决方案

BioZues® Multiplex qPCR Mc Probe Kit

熔解曲线法通常对靶标碱基的依赖性较高,碱基突变会引起熔曲峰(Tm值)偏移,可能产生漏检或误判。RNA靶标稳定性较低,容易产生突变,因此多数熔曲方法不兼容RNA靶标。bevictor伟德官网入口荧光标签解决方案采用非靶标依赖的熔曲方法,用高分子聚合物荧光标签取代一般荧光基团,由相应的荧光标签产生不同Tm值的熔解曲线。适用于一管式多靶点检测,包括病原体的DNA、RNA检测等。




产品特点

1. 多重扩增效果好,单管检测最多可达16个靶标

2. 适用于对称溶、熔解曲线法,灵敏度更高,每个靶标检测可达 20copies/反应



实际样本测试数据

多重扩增测试

使用CM0101,以HPV典型突变位点为靶标,进行单孔7个靶标测试,结果显示:单孔中不同靶标均能有效检出,每个靶标检出限均可达20copies/反应,四通道并孔也能进行7个靶标明确区分。

undefined
undefined
FAM 通道:HPV 51  16
VIC 通道:HPV 45  26
undefined
undefined
 ROX 通道:HPV 82  18
CY5 通道:HPV 31
undefined

4通道 并孔
    



熔曲解决方案选择指南


方案编号

解决方案

产品编号

应用场景

适用方法

方案一

熔解曲线荧光探针(RQp系列)

/

一管式多靶点检测,包括病原DNA多重,多联检等

非对称熔解曲线法

方案二

熔解曲线荧光探针(RQ系列)

/

对称熔解曲线法

方案三

不对称熔曲专用酶

SE0431

SNP分型检测,例如胚系突变的SNP检测,药物基因组学、化疗用药检测、精神病用药检测

非对称熔解曲线法

方案四

熔曲荧光标签法

CM0101

病原体的DNA、病原体的DNA、RNA检测

对称熔解曲线法




上一篇      百分满意,科研无忧 下一篇      【专能优品】熔解曲线法解决方案(上)—熔解曲线荧光修饰