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NGS高质量接头

发布时间:2023年02月28日

        构建基因文库是整个高通量测序(NGS)过程中尤为关键的一步,基因文库的质量将直接影响后续测序工作。通常,文库构建方案要求对片段化的DNA进行末端修复,并在其两端连上特定序列的接头(Adapter),扩增以满足高通量平台测序的读取要求。高质量的接头,有利于与片段DNA源的连接,提高文库构建效率。

bevictor伟德官网入口凭借多年DNA合成经验,拥有优化的合成工艺、严格的质量控制和防污染控制,能最大程度的保证接头连接效率。



接头种类

1.UDI接头 (Unique Dual Index)

        UDI接头可以大幅度降低Illumina测序过程中因为机器测序或者实验过程引入污染,从而尽可能避免测序数据错误。

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2.UMI接头(Unique Molecular Identifiers):

        UMI接头包含P5 Index、P7 Index和UMI元件,其中,UMI分子标签可以设计为完全随机的核苷酸链、部分简并核苷酸链或者固定核苷酸链。根据UMI标签所在的位置,可分为单端UMI(10 nt)接头和双端UMI(5-8 nt)接头。

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3. 转座酶接头

        转座酶法建库技术的关键是Tn5转座子,Tn5转座子是一种细菌转座子,本质是一段含有若干抗性基因和编辑转座酶基因的DNA片段。Tn5用于文库构建时,可将DNA片段化、末端修复、接头连接等多步反应转变为一步反应,缩短建库时间。


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成品接头+定制化接头  @工业化DNA合成平台,打造1/1,000,000交叉污染率接头库


成品接头

优势:

特有的Index序列保证接头碱基平衡;

经过改良的退火工艺保证接头的连接效率和稳定性;


质量控制:

如图所示为Illumina®平台成品双端长接头退火图,接头接近于完全退火。

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定制化接头

优势:

特殊的合成工艺保证接头磷酸修饰的稳定性,对每批次进行严格的质量控制与功能验证;

严格的质量控制保证接头引物极低交叉污染率、极低碱基错误率、高纯度与精准定量;


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如图为60-70 bp接头序列HPLC纯度检测,经过bevictor伟德官网入口特有工艺纯化,69 bp含磷酸化修饰和硫代修饰的接头,5 nmol规格HPLC纯度大于98.5%,CV值为0.29%;25 nmol规格HPLC纯度检测可以达到99.01%,CV值为0.36%。


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